Detectar la presencia de fragmentos de DNA en una muestra, es una necesidad básica en muchos experimentos de biología molecular. A continuación hablaremos de una técnica, que nuestros alumnos de técnico superior en laboratorio clínico y biomédico aprenden y realizan en nuestro centro de formación profesional oficial, Kapital Inteligente, y mediante la cual se consiguen detectar la presencia de dichos fragmentos.
¿Qué es electroforesis y para qué sirve?
La electroforesis se define como el movimiento o dispersión de partículas tras ser sometidas a un campo eléctrico. Generalmente se realiza en una matriz o gel y suele utilizarse para separar fragmentos de ADN, ARN, moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica.
– Las moléculas cargadas se mueven a través de un gel cuando pasa una corriente eléctrica a través de él.
– Se aplica una corriente eléctrica a través del gel para que un extremo del gel tenga una carga positiva y el otro extremo tenga una carga negativa.
-El movimiento de moléculas cargadas se llama migración. Las moléculas migran hacia la carga opuesta. Por lo tanto, una molécula con una carga negativa será atraída hacia el extremo positivo (¡los opuestos se atraen!).
-El gel consiste en una matriz permeable, un poco como un tamiz, a través del cual las moléculas pueden viajar cuando pasa una corriente eléctrica a través de él.
-Las moléculas más pequeñas migran a través del gel más rápidamente y, por lo tanto, viajan más lejos que los fragmentos más grandes que migran más lentamente y, por lo tanto, recorrerán una distancia más corta. Como resultado, las moléculas se separan por tamaño.
¿Cuándo se pide una electroforesis?
Las pruebas de electroforesis se solicitan con mayor frecuencia cuando un médico sospecha una enfermedad o condición que causa la producción de una proteína monoclonal. Una vez que se ha diagnosticado una enfermedad o condición, la electroforesis se puede usar a intervalos regulares para monitorear el curso de la enfermedad y la efectividad del tratamiento.
¿Qué mide la electroforesis?
La electroforesis de proteínas es una prueba que mide proteínas específicas en la sangre. La prueba separa las proteínas en la sangre según su carga eléctrica. La prueba de electroforesis de proteínas a menudo se usa para encontrar sustancias anormales llamadas proteínas M.
Diferentes técnicas:
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Electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida. Electroforesis vertical.
La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para la purificación, análisis y caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas cargadas y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un campo eléctrico. La electroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE).
La separación de péptidos o proteínas se realiza debido al contacto con un campo eléctrico.
A la electroforesis proteica podemos clasificarla con base en el número de propiedades intrínsecas que se usan para su separación. Podemos hacer la electroforesis en una dimensión donde sacamos provecho de alguna propiedad de la proteína o podemos hacer una electroforesis bidimensional donde realizaremos la separación usando dos propiedades y realizando la migración de manera perpendicular.
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Electroforesis de proteínas en gel de agarosa. Electroforesis horizontal.
La electroforesis en geles de agarosa es unos de los métodos más empleados para separar ácidos nucleicos, como por ejemplo, fragmentos de ADN. Está técnica se basa en el hecho de que los ácidos nucleicos se encuentran cargados negativamente debido a los grupos fosfato. Como consecuencia, cuando se aplica un campo eléctrico se desplazan desde el polo negativo hacia el polo positivo. Esta separación se llevará a cabo en una matriz sólida, el gel de agarosa. Existen distintos factores que influyen en la velocidad con que el ácido nucleico migra en el gel, entre ellos, podemos citar:
- El tamaño de la molécula
- La concentración de agarosa
- La conformación del ADN